乳膠顆粒凝集試驗(LPAT)檢測與鑒定熱不穩(wěn)定腸毒素
由Finkelstein等建立,方法如下。
①乳膠敏化 取lOlL羊抗人源LT-I血清與19Oμl pH8、2*緩沖鹽水混勻,再加等體積乳膠制劑,混勻,37℃水浴孵育2h,每15min振搖1次,然后加入用上述緩沖液稀釋的O.1%牛血清白蛋白600uL,3Orain而后即可使用。
②待檢菌液制備 從MacC或EMB或;HE等瓊脂上挑取待檢菌落,在裝有3Ortl的20000U/ml多黏菌素B的Tris-NaCl緩沖液的指形管內(nèi)制成菌懸液,37℃水浴溫育5~3Omin(視菌液濃度而定),離心沉淀細胞,上清液待檢。
③正式試驗 在玻片上加10uL待檢上清和5,aL致敏乳膠,混勻,輕輕搖動3min,在斜射光下觀察結(jié)果,判定標準同一般凝集試驗。如用抗LT全血清致敏乳膠,檢測敏感性為印g/m1的LT;若以親和層析純LT抗體敏化乳膠,其靈敏度可達O.O32ug/m1的LT,且無假陽性結(jié)果。本法還能檢測豬源LT-1。Scotland等用這類商品化試劑盒檢測了1OO株大腸桿菌,其結(jié)果與Y1細胞法*吻合。
Honda等已報道用LT抗體致敏的葡萄球菌凝集試驗宋檢測LT,其原理與上法相似。
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