濾膜由一個多孔的醋酸纖維、硝酸纖維或混合纖維酯的圓形薄膜構(gòu)成。濾膜的孔徑范圍從10nm到8μm或更大，對大多數(shù)微生物分離和計數(shù)時使用的濾膜孔徑為0.43 ~
0.47μm。少數(shù)直徑很小的細(xì)菌需要直徑為0.2?0.22μm的濾膜。

含有方格的膜有助于菌落的計數(shù)。為了處理多個樣品和稀釋液，很多生產(chǎn)廠商生產(chǎn)了使用濾膜的儀器，包括復(fù)式接頭濾器。

釆用適當(dāng)?shù)恼龎夯蜇?fù)壓，可以使大量的水或水溶液快速通過，但是膜的微小的孔徑可以阻止細(xì)菌的通過。殘留在濾膜表面上的細(xì)苗可通過將膜放在吸收墊上進(jìn)行培養(yǎng)，該吸收墊飽和地吸收了液體培養(yǎng)基。膜上的毛細(xì)孔可以吸收營養(yǎng)液并能將營養(yǎng)提供給細(xì)菌。培養(yǎng)后一個細(xì)菌長成一個菌落。所用的培養(yǎng)基是濾膜法的培養(yǎng)基，含有與標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基不相同的成分。這種培養(yǎng)基可以在實驗室自制也可從公司生物公司直接購買脫水制品或配制好的培養(yǎng)基。另外，也可以將濾膜放在配制好的瓊脂培養(yǎng)基表面上進(jìn)行培養(yǎng)。在使用選擇性瓊脂培養(yǎng)基時，由于培養(yǎng)基的組分不同其擴(kuò)散率也不同，這會嚴(yán)重影響培養(yǎng)基的選擇性,所以要測定選擇性瓊脂培養(yǎng)基的適用性。

若樣品可以輕易通過濾膜,那么濾膜菌落計數(shù)具有可以從大量樣品中檢測出少量微生物的優(yōu)點。只要濾膜計數(shù)具有菌落計數(shù)方法的準(zhǔn)確度，那么就可以達(dá)到多管計數(shù)的靈敏度。

另外，當(dāng)細(xì)菌被染色后,將濾膜經(jīng)浸漬油或棉籽油等處理后會變?yōu)橥该鳡?，這時就可
進(jìn)行顯微鏡鏡檢。亞甲基藍(lán)和結(jié)晶紫適用于這種染色。

濾膜可以用于對水、氣體、糖溶液和一些飲料進(jìn)行常規(guī)檢驗。如果將乳和乳制品中的脂肪血細(xì)胞預(yù)先用等辛基苯氧基聚乙氧基乙醇等合適的潤濕劑分解，也可以用濾膜進(jìn)行菌落檢測。

濾膜還有一些其他的用途,如對液體(包括微牛物培養(yǎng)基〉和氣體等進(jìn)行滅菌。在臨床上還能用于無菌液體的無菌測試和從細(xì)菡中分離噬菌體。

用濾膜法進(jìn)行菌落計數(shù)的常規(guī)操作步驟：

(1)儀器的滅菌 將濾膜放在濾紙之間，用紙包好，在121℃下高壓滅菌15min.每天實驗前，將濾器上的螺絲擰松并用紙包好，121℃下高壓滅菌15min。每次過濾不同樣品前，用酒精擦洗漏斗頂部并用火焰灼燒。

將帶有吸收墊的培養(yǎng)罐或培養(yǎng)皿包好后，高壓滅菌或干熱滅菌。

（2）培養(yǎng)皿的制備 在每個培養(yǎng)皿中的無菌吸收墊上無菌操作加入足量的滅菌培養(yǎng)基，使吸收墊達(dá)到飽和，即剛好看不到多余的培養(yǎng)基。

（3）樣品的過濾和膜的培養(yǎng) 將濾器、抽吸泵以及過濾瓶連接。取下濾器上部的漏斗，用無菌的鑷子小心取一片滅菌的濾膜，有格的一面朝上，放在濾器的平面上(操作時要小心，不要污染漏斗內(nèi)部)然后將漏斗復(fù)位，并將其固定好。

將液體祥品倒入漏斗，用抽吸泵進(jìn)行過濾。過濾完樣品后，用25%無菌Ringer氏溶液潔洗漏斗減小泵的吸力，無菌操作取下上部漏斗，用無菌的鑷子將濾膜夾到含有吸收墊的培養(yǎng)皿中，吸收墊預(yù)先在合適的培養(yǎng)基浸透過。將濾膜放在吸收墊上，輕微旋轉(zhuǎn)，以避免在膜和墊之間產(chǎn)生氣泡。蓋上平皿蓋，蓋朝上放入培養(yǎng)箱培養(yǎng)，培養(yǎng)的時間一般小于平板計數(shù)的培養(yǎng)時間。

培養(yǎng)后記下菌落數(shù)并計算每毫升或每克樣品的菌落數(shù)。有時菌落的顏色和膜的顏色無明質(zhì)反差，這時需要對膜或菌落染色，以便準(zhǔn)確計數(shù)。染色程序如下：

(1)孔雀石綠膜染色法培養(yǎng)后，將膜在0.01%的孔雀石綠水溶液中浸泡3?10s，過量的染色液倒入裝有消毒液的缸中。這種方法只對膜染色，而對菌落不染色。

(2)亞甲基藍(lán)齒落染色法用0.01%亞甲基藍(lán)水溶液使吸收墊達(dá)到飽和。然后將帶菌的濾膜在吸收墊上放置5min,將膜移到浸透過水的吸收墊上。亞甲基藍(lán)從膜上的脫色速度快于從菌落上的脫色速度，菌落與膜有明顯的色差時就可以進(jìn)行菌落計數(shù)。